氟化钠对人成骨细胞细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4基因组蛋白乙酰化水平的影响

作者: 严威敏 明娟 游同钊 汪希兰 罗鹏 潘雪莉

关键词: 氟 成骨细胞 CyclinD1基因 CDK4基因 组蛋白乙酰化

摘要:目的 构建人原代成骨细胞体外氟中毒模型,观察不同剂量氟化钠(NaF)对入成骨细胞细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)基因组蛋白乙酰化水平的影响,探讨氟骨症发生发展的分子机制.方法 收集骨科外伤手术健康人(车祸)骨组织,通过酶消化法分离人原代成骨细胞,经鉴定后作为实验对象.以0、125、250、500及1 000 μmol/L NaF处理细胞72 h.定量染色质免疫共沉淀技术检测CyclinD1、CDK4基因转录调控区ChIP1区域及编码区ChIP2区域(对照区)组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平.结果 ①分别以0、125、250、500及1 000 μmol/L NaF处理细胞72 h后,CyclinD1基因转录调控区ChIP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1.152±0.104、1.174±0.187、1.090±0.176、1.170±0.197、1.147±0.097,组间比较差异无统计学意义(F=0.524,P>0.05);H3K14乙酰化水平分别为1.495±0.117、1.465±0.069、1.470±0.187、1.760±1.089、1.341±0.443,组间比较差异无统计学意义(F=0.841,P>0.05);H4K12乙酰化水平分别为1.239±0.286、0.702±0.063、0.765±0.370、1.011±0.321、1.319±0.026,组间比较差异无统计学意义(F=2.329,P>0.05);H4K16乙酰化水平分别为1.452±0.217、1.621±0.165、1.462±0.090、1.510±0.146、1.564±0.154,组间比较差异无统计学意义(F=0.123,P> 0.05).②CDK4基因转录调控区ChIP1区域组蛋白H3K9乙酰化水平分别为1.472±0.163、1.580±0.161、1.585±0.132、1.451±0.136、1.560±0.039,组间比较差异无统计学意义(F=0.461,P>0.05);H3K14乙酰化水平分别为0.919±0.149、0.900±0.059、0.911±0.162、0.663±0.049、0.841±0.122,组间比较差异无统计学意义(F=0.974,P>0.05);H4K12乙酰化水平分别为0.456±0.142、0.911±0.126、0.969±0.185,1.110±0.146、0.931±0.141,组间比较差异无统计学意义(F=5.459,P>0.05);H4K16乙酰化水平分别为1.315±0.083、1.374±0.153、1.423±0.055、1.300±0.132、1.385±0.696,组间比较差异无统计学意义(F=1.663,P> 0.05).③CyclinD1、CDK4基因编码区ChIP2区域组蛋白H3K9、H3K14、H4K12、H4K16乙酰化水平,各NaF处理组间比较差异均无统计学意义(F=0.392、0.823、0.999、0.397,0.705、0.049、1.065、0.196,P均>0.05).结论 在氟处理的人原代成骨细胞中,未观察到细胞周期调控基因CyclinD1、CDK4转录调控区组蛋白乙酰化参与其表达调控.


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